UYGULAMALAR
MİKROSKOP TEKNİKLERİ
Detaylı numune analizi için optik, elektron ve dijital mikroskop teknikleri.
MİKROSKOP PRENSİBİ
Çalışma Prensibi:
-Mikroskop, yardımsız bir göz yardımıyla çözülemeyen yapıların çözülebileceği büyütülmüş görüntü elde etmektir.
-Aydınlatma tipinde, ışık kaynağının önünde ayarlanabilir toplayıcı lens vardır.
-Görüntü oluşumu iki aşamada gerçekleşir, ilk aşama objektif tarafından oluşturulur. Gerçek, ters ve büyütülmüştür.
Çözme Gücü:
Mikroskobun faydalı büyütme oranı çözümleme gücü ile sınırlıdır.
-Çözümleme gücü, aydınlatıcı ışının dalga boyu ile sınırlıdır
-Çözünürlük, ışığın dalga uzunluğu ve objektif ve kondansatör lensin ışık üretme gücü gibi belirli fiziksel parametreler tarafından belirlenir
Sayısal Açıklık (NA):
– Bir merceğin sayısal açıklığı, merceğin çapının odak uzunluğuna oranıdır.
-NA bir merceğin çözümleme gücünün bir indeksidir
-NA bir mercekten geçen ışık miktarını azaltarak azaltılabilir.
Çözünürlük Sınırı:
-İki noktanın ayrı ayrı tanımlanabilmesi için aralarındaki minimum mesafedir. Çözünürlük sınırı güç veya çözünürlük ile ters orantılıdır. Dalga boyu daha kısa ise çözünürlük daha büyük olacaktır.
-Çalışma mesafesi: Objektif ile objektif kızağı arasındaki mesafedir.
-Çalışma mesafesi büyütme arttıkça azalır
-Büyütme: Mikroskop altında görülen bir nesnenin boyutunun çıplak gözle gözlemlenen gerçek boyuta oranıdır.
Görüntü Parlaklığı
-Burada NA objektif sayısal açıklığı ve M büyütmedir. Yukarıdaki denklemde verilen oran, trans aydınlatmada objektifin ışık toplama gücünü ifade eder.
-Aydınlatmanın yoğunluğu, kondansatörün sayısal açıklığının karesine ve ışık kaynağı görüntüsünün büyütme oranının karesine bağlıdır.
-Sonuç olarak, numune görüntüsünün parlaklığı, göz merceğine veya kamera sistemine ulaştığında objektif sayısal açıklığının karesi ile doğru orantılıdır.
-Bu nedenle, numuneleri geçirgen ışıkta incelerken, kondansatörü değiştirmeden objektifi değiştirmek, NA ve büyütmedeki değişikliklere yanıt olarak görüntü parlaklığını etkiler
MİKROSKOP TÜRLERİ
Mikroskoplar Sınıflandırma:
Mikroskopların farklı türleri ve aşağıda 4 tanesini bulabilirsiniz:
-Işık Mikroskopları (Ters, Dik)
-Stereo Mikroskoplar
-Konfokal Mikroskoplar
-Elektron Mikroskopları
Işık Mikroskobu:
1.Işık mikroskopları tüm mikroskopların en basitidir.
2.Küçük nesnelerin büyütülmüş görüntülerini üretmek için ışık ışınlarını bükmek ve odaklamak için lensler kullanın.
3.Işık mikroskopları çıplak gözle görülemeyen örnekleri görüntülemek için kullanılır. Bir mikroskobun büyütme oranı genellikle 40x, 100x, 400x ve bazen 1000x’tir.
4. Ters mikroskoplar, büyük parçaları kırıklar veya hatalar için yüksek büyütmede incelemek için kullanılır. Temel bir fark, numunelerin düz tarafa yerleştirilmesidir ve numuneler sahnede düz durabilecek şekilde hazırlanmalıdır.
Stereo Mikroskoplar
1.Stereo mikroskoplar, elinizde tutabileceğiniz çeşitli örneklere bakmak için kullanılır.
2.Bir stereo mikroskop 3 boyutlu bir görüntü sağlar ve tipik olarak 10x-40x arasında büyütme sağlar
3.Hem iletilen hem de yansıtılan aydınlatma sağlar ve ışığın içinden geçmesine izin vermeyecek bir örneği görüntülemek için kullanılabilir.
4.Bu tür mikroskopların kullanım alanları arasında yüzeylere bakmak, saat yapımı ve devre kartlarını incelemek vb. yer alır.
Lazer Taramalı Konfokal Mikroskoplar
1. Görüntü oluşumu için normal ışık kullanan stereo ve ışık mikroskoplarının aksine, konfokal boyanmış örnekleri taramak için bir lazer ışığı kullanır
2.. Işın son derece kısa dalga boyuna sahiptir, yolundaki çoğu nesneye çarpar ve mikroskobun çözünürlüğünü önemli ölçüde artırır. Bu örnekler slaytlar üzerinde hazırlanır ve dikromatik ayna yardımıyla yerleştirilir, cihazlar bir bilgisayar ekranında büyütülmüş bir görüntü üretir.
3.Operatörler birden fazla taramayı bir araya getirerek 3D görüntüler de oluşturabilir.
4.Çözünürlükleri ışık mikroskoplarından daha iyidir ve genellikle hücre biyolojisi + tıbbi uygulamalarda kullanılırlar.
KONTRAST YÖNTEMLERİ
Parlak Alan (BF)
-Mikroskop aydınlatma tekniklerinin en temel şeklidir ve genellikle ışık mikroskopları ile kullanılır.
-Bu isim, numunenin karanlık olması ve çevresindeki parlak görüş alanıyla kontrast oluşturması gerçeğinden türetilmiştir.
-Mikroskop, yüksek büyütmelerde gerekli olan yoğun aydınlatmayı ve daha düşük büyütmeler için daha düşük ışık seviyelerini sağlayabilen ışık kaynağına sahip olmalıdır.
-Bazı numuneler boyanmadan görüntülenebilir ve bf tekniğinde kullanılan optikler numunenin rengini değiştirmez.
Karanlık Alan (DF)
DF aydınlatması için ışık yolu, objektifin dış içi boş halkasından geçer, yüksek bir geliş açısıyla numuneye düşer, yüzeyden yansır, ardından objektif lensinin içinden geçer ve son olarak göz merceğine veya kameraya ulaşır
– Düz olmayan özelliklere (çatlaklar, gözenekler, kazınmış tane sınırları vb.) sahip düz bir yüzeye sahip numuneler için
– DF görüntüsü, objektife daha fazla ışık saçan düz olmayan özelliklere karşılık gelen daha parlak alanlara sahip koyu bir arka plan gösterir.
Faz Kontrastı
-Faz kontrastında faz değişikliklerini görünür kılmanın temel prensibi, aydınlatıcı ışığı örnekten saçılan ışıktan ayırmak ve bunları farklı şekilde manipüle etmektir.
– Aydınlatıcı ışığın bir kısmı numune tarafından farklı renklerde saçılır (yeşil, sarı ve kırmızı) Boyanmamış bir numuneyi gözlemlerken saçılan ışık zayıftır ve tipik olarak -90 açıyla faz kaydırmalıdır.
– Arka planın neredeyse aynı yoğunluğa sahip olması, düşük görüntü kontrastına neden olur.
-Işık aynı zamanda elektromanyetik titreşim olarak da tanımlanabilir ve bir ip boyunca titreşim gibi yayıldığı kaynaktan dışarıya doğru hareket eder.
Saf Alüminyum Mikroyapısı
a)Parlak Alan
b)Polarize Işık
Diferansiyel Girişim Kontrastı (DIC)
-Polarize ışık mikroskobunun bu karmaşık formunda, grinin tonlarıyla 3 boyutlu bir görüntü oluşturmak için iki hafif ayrı, düzlem polarize ışık demeti kullanılır.
-Örneklerdeki belirgin tepeler ve vadiler yanıltıcı olabileceğinden DIC görüntülerini yorumlarken dikkatli olunmalıdır.
-Bir tepenin yüksekliği, hem özelliğin gerçek kalınlığının hem de kırılma indisinin bir ürünüdür.
-DIC sistemlerinin varyasyonları, kökenleri olan Nomarski ve de Senarmont’un adlarıyla anılır. Çözünürlüğü veya kontrastı en üst düzeye çıkarmak için seçenekler seçilebilir.
Diferansiyel Girişim Kontrastı (DIC)
Parlak Alan (BF)
Karanlık Alan (DF)
Parlak Alan Eğik
Polarize Işık Alanı (PBF)
Polarize Parlak Alan λ-plakası
Farklı Arayüz Kontrastı (DIC)
MİKROSKOP TEKNİKLERİ İÇİN KILAVUZUNUZU ALIN
Kapsamlı broşürümüz ile Mikroskop Teknikleri hakkında bilmeniz gereken her şeyi keşfedin.
